为什么同一种提取物,用 UV 法和 HPLC 法得出的数值不同

UV 法含量测定会把在某一波长处有吸收的所有成分都计入。HPLC 法则先把各化合物分离开,再只计入方法所指定的那些。两种数值回答的是不同的问题。

收到两份报价,对应的似乎是同一种提取物。一份用 UV 法标明活性成分含量,另一份用 HPLC 法,而且 UV 的数值明显更高。两份报价都未必有错,所用原料甚至可能是同一种。原因在于两种方法计的是不同的东西,而且各自都以某一指定物质来表示结果。

在比较两个含量测定数值之前,或在把检测报告与您自己实验室的结果相比较之前,可做以下六项核对。文中依据的是欧洲草药药品指南、分析方法验证的国际指南以及已发表的研究;示例取自我们自己的规格。我们此前的文章讲的是规格、提取比例、检测报告(COA)、溶剂和载体,以及污染物各行;本文只谈含量测定方法。

01 / 测定方法

含量测定一行写明方法了吗?

含量测定数值离不开得出它的那种方法。欧洲草药药品指南把这一点写进了规格的定义,即“一份试验清单、对分析方法和生物学方法的引用,以及适当的可接受标准”;而符合规格,则是指物料“按所列分析方法检验时,将符合所列可接受标准”。1

在规格上,方法往往就是数值后面的一个简短词语:UV、HPLC 或其他技术。没有这个词语的一行是不完整的。2023 年一篇由 American Botanical Council 及合作机构的作者撰写的综述指出,分光光度法含量测定的结果“有时是检测报告上提供的、关于植物原料化学组成的唯一数据”;该综述还补充说,说明定量结果所依据的方法“应成为行业标准做法”。2

核对: 含量测定一行是否写明了方法,以及规格、报价和检测报告写明的是否为同一种方法。

02 / UV

UV 数值计入的是什么?

在规格上,UV 指紫外-可见分光光度法。先将提取物溶解;在许多含量测定中,还要用试剂使目标化合物生成有色产物;然后测定溶液在某一波长处吸收的光。溶液中的各化合物并未相互分离,所以凡是在该波长处有吸收的成分,都会计入结果。2

该综述指出了由此带来的后果:分光光度法得到的浓度“往往高于其他定量方法的结果,原因是在目标波长处有吸收的非目标分析物造成干扰”。它举的例子是水飞蓟提取物,其中水飞蓟素浓度“用 HPLC-UV 法测定一般在 30% 至 65% 之间,用分光光度法测试则为 65–80%”。2

分析方法验证指南为这一特性给出了名称。专属性和选择性描述的是“其他物质干扰分析物测定的程度”。3 欧洲草药药品指南所举的非专属性含量测定的例子,就是紫外-可见分光光度法含量测定。1 因此,UV 数值是一类化合物的合计数值,应当按此来理解。

核对: UV 数值意在计入哪一类化合物,以及方法所用的试剂和波长。

03 / HPLC

HPLC 数值计入的是什么?

HPLC 即高效液相色谱法,它在进行任何测定之前,先把溶解后的提取物分离成各个化合物。随后,各化合物以各自独立的峰出现,方法计入的是它所指定的那些峰。色谱柱之后的检测器通常也是靠光来测量:该综述称 UV/vis 检测器为“使用最广泛的检测系统”。2 两种方法的主要差别在于分离这一步。

因此,HPLC 数值代表的是方法所指定的化合物,可以是一种,也可以是几种相加,规格应当写明是哪些化合物。欧洲药品管理局关于欧洲越橘的报告就是一例。报告引述了《欧洲药典》对欧洲越橘鲜果精制标准化干提取物的定义:花青素含量 32.4% 至 39.6%,“以氯化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷表示”。按报告所列,该含量测定的色谱图显示二十个指定的峰:十五种花青素和五种花色素,后者即花青素不含糖基的形式。4

方法没有指定的化合物不被计入,无论提取物中含有多少。此外,有些类别只能部分分离:对于原花青素,综述指出,较大分子的分离“用色谱手段很困难;因此供应商通常采用分光光度法进行定量分析”。2

核对: HPLC 数值所计入的化合物,以及该数值是这些化合物之和,还是某一种指定化合物的含量。

04 / 对照品

以哪种对照品为准,结果又以什么表示?

在含量测定中,两种方法都不能直接从样品上读出一个百分数。仪器信号是参照某一指定物质换算成含量的,该物质要么作为对照品同时测定,要么已纳入计算之中;在欧洲指南中,对照品用于“鉴别和纯度检验以及含量赋值”。1 结果随后以某一指定物质或某一类物质来表述。草药物质和制剂标示指南给出了措辞:番泻叶中的羟基蒽苷“以番泻苷 B 计”;银杏叶提取物中的黄酮类“以黄酮苷表示”。5 写明的物质不一定就是实际测得的物质:银杏的药典方法通常是在酸水解之后测定黄酮类,酸水解会使其糖基脱落。2

更换对照品,数值就会变化,尽管方法和原料都没有变。用显色反应(即 DMAC 法)测定蔓越莓原花青素时,有一项研究报告说,以蔓越莓本身制备的对照品“所得数值是以原花青素 A2 测定的数值的 2.2 倍”。6

分子的形式同样重要。欧洲越橘报告用两个数字描述同一种提取物,即“36% 花色苷,相当于 25% 花色素”:第二个数字计的是同样的分子,但不含其糖基部分。4

我们的蔓越莓提取物就是一例:其含量测定表述既写明了方法,也写明了对照品。其规格为总可溶性原花青素(PACs)含量 30% 及以上,采用 BL-DMAC / UV-Vis 法检测,结果以原花青素 A2 当量表示。该方法以原花青素 A2 为对照品,在 640 nm 处测定吸光度;结果并不代表分离所得 A 型 PAC 的纯度。采用不同分析方法或校准对照品所得的结果,并不能直接比较。

核对: 所用的对照品,以及结果以什么表示:某一种指定化合物、一类化合物,或是带糖基或不带糖基的分子。

05 / 方法的选择

哪种方法适合您需要的数值?

HPLC 并非在任何情况下都是更好的方法。验证指南说明了验证任何一种方法都必须证明什么:“分析方法适合其预期用途”。3 如果标志成分是一种或少数几种化合物,能将其分离的方法可以直接测定这些化合物。如果标志成分是色谱无法分离的一整类化合物,通常就用总量测定。2

一项关于蔓越莓 DMAC 含量测定的多实验室研究,称其为“用于测定蔓越莓样品中总 PACs 的一种简单、稳健且相对专属的分光光度法”,并补充说它“可能不适合用于比较不同食品类型的浓度”。7

总量测定无法显示这些化合物来自何处:就用于原花青素的显色反应而言,综述指出,没有一种“能够区分不同来源的 PACs”。2 欧洲草药药品指南主张,只要可行,就优先采用专属性方法;如有正当理由采用非专属性含量测定,指南则指出可借助第二项试验:“可将含量测定与适当的鉴别试验(例如色谱指纹图谱)结合使用”。1 验证指南对此作了一般性的表述:专属性不足“应由一种或多种其他辅助分析方法来补充,除非有适当理由”。3

核对: 方法是否适合该标志成分;采用总量测定时,与之并用的是哪一种鉴别试验。

06 / 您的实验室

您自己的检测会采用同一种方法吗?

一个数值只能用得出它的那种方法来确认。如果您的实验室用 HPLC 法检测所交货物,而规格是按 UV 法制定的,那么检测结果就不是对照该规格得出的结果,无论结果偏低还是偏高。两种数值之间没有通用的换算系数:差距取决于提取物中还含有什么,以及每个结果是如何表示的。

即使用同一种方法,两家实验室也不会得出同样的数字。在这项多实验室研究中,五家实验室用同一种 DMAC 法分析了同样的十一个蔓越莓样品。以相对标准偏差计,同一实验室内的结果平均相差 4.1%,不同实验室之间平均相差 16.9%(范围为 8% 至 32%)。7

因此,下单之前要先确定三件事:方法,即写明方法名称并引用某部药典或书面程序;对照品;以及双方都能接受的、两家实验室结果之间的差异。对于有药典专论的药品,欧洲指南说明了在使用了其他方法时以哪种方法为准:“如有疑问或争议,以药典的分析方法为准。”1 没有适用的药典方法时,就要由商定的规格来起这个作用。我们关于检测报告(COA)的文章,讲了收到检测报告时应做的核对。

核对: 您的实验室与为该检测报告做检测的实验室,所用的是否为同一种方法、同一种对照品,以及双方能接受两者结果之间有多大差异。

需要提供的信息

询价时请说明测定方法

当含量测定数值对您的产品很重要时,请告知我们:

  • 原料名称,如有多个使用部位可选,请一并注明所需部位;
  • 您的预期用途和目标市场;
  • 您需要的化合物或化合物类别,以及目标含量;
  • 您的质量团队所采用的测定方法,以及对照品(若测定方法涉及对照品);
  • 您是否会自行检测所交货物,以及采用哪种方法;
  • 您需要哪些技术文件,例如规格书或检测报告(COA);
  • 您的姓名、公司和联系方式。

活性成分的百分含量与检测方法、对照品相对应,才能更准确地描述原料。请将这些要求与目标含量一并告诉我们,以便规格和报价准确对应您的项目需求。产品册所列规格范围仅供参考,可行性、供应情况和价格随报价确认。

产品示例取自 YOHOLIFE® 的规格和技术文件。本文不提供我们原料的其他含量测定数值;所选规格的测定方法和规格书,将在您询价时确认。资料来源 1、3、4 和 5 是为药品撰写的,此处引用其定义和示例;资料来源 2 是对已发表研究的综述;资料来源 6 和 7 是针对同一种蔓越莓含量测定方法的研究,本文仅参阅了其已发表的摘要。所引资料已于 2026 年 11 月 12 日核对。

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